Izolace DNA a RNA z ostatních materiálů
Souprava PowerBiofilm slouží k izolaci z "biofilmu" - určeno pro stěry bakterií z nejrůznějších povrchů, kde se mohou nalézat bakterie. Možnost izolace DNA nebo RNA. Výhoda kitu spočívá v možnosti izolovat i ze stěru nebo odběru materiálu, kde se bakterie nacházejí ve velmi nízké koncentraci. Například při stěru z povrchu sádry a získání výchozího materiálu 0,20 g je možné získat výtěžek 15 -28 ng/ul, při izolaci bakterií z povrchu skal při počátečním vzorku 0,15 g možné získat výtěžek kolem 13 -54 ng/ul.
Souprava PowerFood je určena pro izolaci DNA ze vzorků potravin (džus, mléčné výrobky, masné produkty, ovoce, zelenina). Před izolací je doporučeno vzorek kultivovat, ale je možné provádět izolaci i z nekultivovaných vzorků. Za pomoci kitu PowerFood™ Microbial DNA Isolation byla úspěšně vyizolována DNA ze známých patogenů nalézajících se v potravinách. Následně byla získaná DNA úspěšně detekována za pomocí real-time kvantitativní PCR:
|
Patogen |
Potravina |
|
Clostridum difficile |
syrové hovězí maso, předpřipravený salát |
|
Clostridium perfringens |
syrové hovězí maso, mrkvový džus |
|
Enterococcus faecalis |
předpřipravený salát |
|
Escherichia coli |
jahody, pomerančový džus |
|
Lactobacillus acidophilus |
jogurt |
|
Lactobacillus spp. |
jogurt |
|
Listeria Monocytogenes |
plísňový sýr |
|
Salmonella enterica |
jahody, pomerančový džus, plísňový sýr |
|
Shigella spp. |
kreveta |
|
Vibrio spp. |
kreveta |
Schéma izolace kitem PowerFood
Vzorek 1,8 ml potravin obsahující mikroorganismy je rozsuspendován v lyzačním pufru a následně centrifugován. Získaný supernatant je přemístěn do rozbíjecí zkumavky obsahující rozbíjecí částice určené pro rozbití malých mikrobiálních buněk a poté umístěn do nástavce (adaptéru) pro rozbíjecí zkumavky a vortexován na MoBio vortexu. Po odstranění proteinů a inhibitorů je celková genomická DNA zachycena na křemičitém filtru (silika spin filtru) umístěného na dně kolonky uvnitř zkumavky. Přichycená DNA je poté vymyta a eluována z kolonky do čisté zkumavky.
| Izolace DNA a RNA z ostatních materiálů | |
|---|---|
| PowerFood Microbial DNA Isolation Kit | Detail |
| PowerBiofilm RNA Isolation Kit | Detail |
| PowerBiofilm DNA Isolation Kit | Detail |